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La mélamine est un contaminant alimentaire reconnu, susceptible d'être présent accidentellement ou intentionnellement dans certaines catégories d'aliments. Cette étude visait à vérifier la détection et la quantification de la mélamine dans les préparations pour nourrissons et le lait en poudre. Quarante échantillons alimentaires disponibles dans le commerce, incluant des préparations pour nourrissons et du lait en poudre, provenant de différentes régions d'Iran, ont été analysés. La teneur approximative en mélamine des échantillons a été déterminée par chromatographie liquide à haute performance couplée à la détection ultraviolette (CLHP-UV). Une courbe d'étalonnage (R² = 0,9925) a été établie pour la détection de la mélamine dans la gamme de 0,1 à 1,2 μg mL⁻¹. Les limites de quantification et de détection étaient respectivement de 1 μg mL⁻¹ et de 3 μg mL⁻¹. Des analyses ont été effectuées sur des préparations pour nourrissons et du lait en poudre afin de détecter la présence de mélamine. Les résultats ont montré que les teneurs en mélamine dans les échantillons étaient respectivement de 0,001 à 0,095 mg/kg pour les préparations pour nourrissons et de 0,001 à 0,004 mg/kg pour le lait en poudre. Ces valeurs sont conformes à la législation européenne et au Codex Alimentarius. Il est important de noter que la consommation de ces produits laitiers à teneur réduite en mélamine ne présente pas de risque significatif pour la santé des consommateurs. Ce constat est également corroboré par les résultats de l'évaluation des risques.
La mélamine est un composé organique de formule moléculaire C₃H₆N₆, dérivé du cyanamide. Très peu soluble dans l'eau, elle contient environ 66 % d'azote. Composé industriel largement utilisé, la mélamine trouve de nombreuses applications légitimes dans la production de plastiques, d'engrais et d'équipements pour l'industrie agroalimentaire (emballages et ustensiles de cuisine inclus)¹,². Elle sert également de vecteur pour le traitement de certaines maladies. Cependant, sa forte teneur en azote peut conduire à une utilisation inappropriée, notamment en conférant aux ingrédients alimentaires des propriétés similaires à celles des protéines³,⁴. L'ajout de mélamine aux produits alimentaires, y compris les produits laitiers, augmente ainsi leur teneur en azote. C'est pourquoi on a pu conclure, à tort, que la teneur en protéines du lait était supérieure à la réalité.
Pour chaque gramme de mélamine ajouté, la teneur en protéines des aliments augmente de 0,4 %. Cependant, la mélamine est très soluble dans l'eau et peut avoir des conséquences bien plus graves. L'ajout de 1,3 gramme de mélamine à des produits liquides comme le lait peut augmenter sa teneur en protéines de 30 %^5,6. Bien que la mélamine soit ajoutée aux aliments d'origine animale, voire humaine, pour augmenter leur teneur en protéines⁷, la Commission du Codex Alimentarius (CAC) et les autorités nationales n'ont pas approuvé son utilisation comme additif alimentaire et la considèrent comme dangereuse en cas d'ingestion, d'inhalation ou d'absorption cutanée. En 2012, le Centre international de recherche sur le cancer (CIRC) de l'Organisation mondiale de la Santé (OMS) a classé la mélamine comme cancérogène du groupe 2B, car elle peut être nocive pour la santé humaine⁸. Une exposition prolongée à la mélamine peut provoquer un cancer ou des lésions rénales². La mélamine présente dans les aliments peut se complexer avec l'acide cyanurique pour former des cristaux jaunes insolubles dans l'eau, susceptibles d'endommager les tissus rénaux et vésicaux, et de provoquer des cancers des voies urinaires et une perte de poids^9,10. Elle peut entraîner une intoxication alimentaire aiguë et, à fortes concentrations, la mort, notamment chez les nourrissons et les jeunes enfants¹¹. L'Organisation mondiale de la Santé (OMS) a également fixé la dose journalière admissible (DJA) de mélamine pour l'homme à 0,2 mg/kg de poids corporel par jour, conformément aux recommandations du CAC¹². L'Agence américaine des produits alimentaires et médicamenteux (FDA) a fixé la limite maximale de résidus (LMR) de mélamine à 1 mg/kg dans les préparations pour nourrissons et à 2,5 mg/kg dans les autres aliments^2,7. En septembre 2008, il a été rapporté que plusieurs fabricants américains de préparations pour nourrissons avaient ajouté de la mélamine au lait en poudre afin d'augmenter la teneur en protéines de leurs produits, ce qui a provoqué des intoxications au lait en poudre et déclenché une crise sanitaire nationale liée à la mélamine, touchant plus de 294 000 enfants et entraînant l'hospitalisation de plus de 50 000 d'entre eux. 13
L'allaitement maternel n'est pas toujours possible en raison de divers facteurs tels que les difficultés de la vie urbaine, la maladie de la mère ou de l'enfant, ce qui conduit à l'utilisation de préparations pour nourrissons. Par conséquent, des usines ont été créées pour produire des préparations pour nourrissons dont la composition est aussi proche que possible de celle du lait maternel¹⁴. Les préparations pour nourrissons vendues sur le marché sont généralement fabriquées à partir de lait de vache et contiennent un mélange spécifique de matières grasses, de protéines, de glucides, de vitamines, de minéraux et d'autres composés. Afin de se rapprocher du lait maternel, la teneur en protéines et en matières grasses des préparations varie et, selon le type de lait, elles sont enrichies en vitamines et en minéraux tels que le fer¹⁵. Les nourrissons étant un groupe fragile et exposés à un risque d'intoxication, la sécurité de la consommation de lait en poudre est primordiale pour leur santé. Après le cas d'intoxication à la mélamine chez des nourrissons chinois, les pays du monde entier ont porté une attention particulière à cette question, et la sensibilité dans ce domaine s'est accrue. Il est donc essentiel de renforcer le contrôle de la production de préparations pour nourrissons afin de protéger la santé des nourrissons. Il existe différentes méthodes pour détecter la mélamine dans les aliments, notamment la chromatographie liquide à haute performance (HPLC), l'électrophorèse, la méthode sensorielle, la spectrophotométrie et le test immuno-enzymatique antigène-anticorps16. En 2007, la Food and Drug Administration (FDA) américaine a développé et publié une méthode HPLC pour la détermination de la mélamine et de l'acide cyanurique dans les aliments, qui est la méthode la plus efficace pour déterminer la teneur en mélamine17.
Les concentrations de mélamine dans les préparations pour nourrissons, mesurées par une nouvelle technique de spectroscopie infrarouge, variaient de 0,33 à 0,96 milligrammes par kilogramme (mg/kg).¹⁸ Une étude menée au Sri Lanka a révélé des taux de mélamine dans le lait entier en poudre allant de 0,39 à 0,84 mg/kg. Par ailleurs, les échantillons de préparations pour nourrissons importées présentaient les taux de mélamine les plus élevés, soit 0,96 et 0,94 mg/kg respectivement. Ces taux sont inférieurs à la limite réglementaire (1 mg/kg), mais un programme de surveillance est nécessaire pour garantir la sécurité des consommateurs.¹⁹
Plusieurs études ont examiné les concentrations de mélamine dans les préparations pour nourrissons iraniennes. Environ 65 % des échantillons contenaient de la mélamine, avec une moyenne de 0,73 mg/kg et une concentration maximale de 3,63 mg/kg. Une autre étude a rapporté des concentrations de mélamine dans les préparations pour nourrissons allant de 0,35 à 3,40 µg/kg, avec une moyenne de 1,38 µg/kg. Globalement, la présence et la concentration de mélamine dans les préparations pour nourrissons iraniennes ont été évaluées dans diverses études, certains échantillons présentant des concentrations supérieures à la limite maximale fixée par les autorités réglementaires (2,5 mg/kg/dose).
Compte tenu de l'importante consommation directe et indirecte de lait en poudre dans l'industrie agroalimentaire et du rôle essentiel des préparations pour nourrissons dans l'alimentation infantile, cette étude visait à valider une méthode de détection de la mélamine dans le lait en poudre et les préparations pour nourrissons. Plus précisément, le premier objectif était de développer une méthode quantitative rapide, simple et précise de détection de la mélamine dans les préparations pour nourrissons et le lait en poudre par chromatographie liquide à haute performance (CLHP) et détection ultraviolette (UV). Le second objectif était de déterminer la teneur en mélamine des préparations pour nourrissons et du lait en poudre commercialisés sur le marché iranien.
Les instruments utilisés pour l'analyse de la mélamine varient selon le lieu de production alimentaire. Une méthode d'analyse HPLC-UV sensible et fiable a été utilisée pour mesurer les résidus de mélamine dans le lait et les préparations pour nourrissons. Les produits laitiers contiennent diverses protéines et matières grasses susceptibles d'interférer avec la mesure de la mélamine. Par conséquent, comme l'ont noté Sun et al.²², une stratégie de purification appropriée et efficace est nécessaire avant l'analyse instrumentale. Dans cette étude, nous avons utilisé des filtres seringues jetables. Nous avons utilisé une colonne C18 pour séparer la mélamine dans les préparations pour nourrissons et le lait en poudre. La figure 1 présente le chromatogramme de détection de la mélamine. De plus, le taux de récupération des échantillons contenant 0,1 à 1,2 mg/kg de mélamine variait de 95 % à 109 %, l'équation de régression était y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925) et les valeurs de l'écart-type relatif (RSD) variaient de 0,8 % à 2 %. Les données disponibles indiquent que la méthode est fiable dans la gamme de concentrations étudiée (tableau 1). Les limites de détection (LD) et de quantification (LQ) instrumentales de la mélamine étaient respectivement de 1 μg mL⁻¹ et 3 μg mL⁻¹. De plus, le spectre UV de la mélamine présentait une bande d'absorption à 242 nm. La méthode de détection est sensible, fiable et précise. Elle peut être utilisée pour le dosage de routine de la mélamine.
Des résultats similaires ont été publiés par plusieurs auteurs. Une méthode de chromatographie liquide à haute performance couplée à la détection par barrette de diodes (CLHP) a été mise au point pour l'analyse de la mélamine dans les produits laitiers. Les limites inférieures de quantification étaient de 340 μg kg⁻¹ pour le lait en poudre et de 280 μg kg⁻¹ pour les préparations pour nourrissons à 240 nm. Filazzi et al. (2012) ont rapporté que la mélamine n'était pas détectée dans les préparations pour nourrissons par CLHP. Cependant, 8 % des échantillons de lait en poudre contenaient de la mélamine à une concentration de 0,505 à 0,86 mg/kg. Tittlemiet et al.²³ ont mené une étude similaire et ont déterminé la teneur en mélamine des préparations pour nourrissons (échantillon n° 72) par chromatographie liquide à haute performance couplée à la spectrométrie de masse (CLHP-SM/SM), qui était d'environ 0,0431 à 0,346 mg kg⁻¹. Dans une étude menée par Venkatasamy et al. En 2010, une approche de chimie verte (sans acétonitrile) et la chromatographie liquide à haute performance en phase inverse (CLHP-RP) ont été utilisées pour doser la mélamine dans les préparations pour nourrissons et le lait. La gamme de concentrations des échantillons s'étendait de 1,0 à 80 g/mL et la réponse était linéaire (r > 0,999). La méthode a montré des taux de récupération de 97,2 % à 101,2 % sur la gamme de concentrations de 5 à 40 g/mL et une reproductibilité inférieure à 1,0 % d'écart-type relatif. De plus, les limites de détection (LOD) et de quantification (LOQ) observées étaient respectivement de 0,1 g/mL et 0,2 g/mL. En 2011, Lutter et al. ont déterminé la contamination par la mélamine du lait de vache et des préparations pour nourrissons à base de lait par CLHP-UV. Les concentrations de mélamine variaient de < 0,2 à 2,52 mg/kg. La gamme dynamique linéaire de la méthode HPLC-UV était de 0,05 à 2,5 mg kg⁻¹ pour le lait de vache, de 0,13 à 6,25 mg kg⁻¹ pour les préparations pour nourrissons à teneur protéique inférieure à 15 % et de 0,25 à 12,5 mg kg⁻¹ pour les préparations pour nourrissons à teneur protéique supérieure ou égale à 15 %. Les limites de détection (LOD) et de quantification (LOQ) étaient de 0,03 mg kg⁻¹ (0,09 mg kg⁻¹) pour le lait de vache, de 0,06 mg kg⁻¹ (0,18 mg kg⁻¹) pour les préparations pour nourrissons à teneur protéique inférieure à 15 % et de 0,12 mg kg⁻¹ (0,36 mg kg⁻¹) pour les préparations pour nourrissons à teneur protéique supérieure ou égale à 15 %, avec un rapport signal/bruit de 3 et 1025 pour les LOD et LOQ, respectivement. (Diebes et al.) En 2012, des chercheurs ont analysé les concentrations de mélamine dans des préparations pour nourrissons et du lait en poudre par HPLC/DMD. Dans les préparations pour nourrissons, les concentrations minimale et maximale étaient respectivement de 9,49 mg kg⁻¹ et 258 mg kg⁻¹. La limite de détection (LD) était de 0,05 mg kg⁻¹.
Javaid et al. ont rapporté que les résidus de mélamine dans les préparations pour nourrissons se situaient entre 0,002 et 2 mg kg⁻¹ par spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier (FT-IR) (limite de détection [LD] = 1 mg kg⁻¹ ; limite de quantification [LQ] = 3,5 mg kg⁻¹). Rezai et al.²⁷ ont proposé une méthode HPLC-DAD (λ = 220 nm) pour le dosage de la mélamine et ont obtenu une LQ de 0,08 μg mL⁻¹ pour le lait en poudre, inférieure à celle obtenue dans la présente étude. Sun et al. ont développé une méthode RP-HPLC-DAD pour la détection de la mélamine dans le lait liquide par extraction en phase solide (SPE). Ils ont obtenu une LD de 18 et une LQ de 60 μg kg⁻¹, ce qui représente une sensibilité supérieure à celle de la présente étude. Montesano et al. ont confirmé l'efficacité de la méthode HPLC-DMD pour l'évaluation de la teneur en mélamine dans les suppléments protéiques avec une limite de quantification de 0,05 à 3 mg/kg, qui était moins sensible que la méthode utilisée dans cette étude29.
Il est indéniable que les laboratoires d'analyse jouent un rôle important dans la protection de l'environnement en surveillant les polluants dans divers échantillons. Cependant, l'utilisation d'un grand nombre de réactifs et de solvants lors des analyses peut entraîner la formation de résidus dangereux. C'est pourquoi la chimie analytique verte (CAV) a été développée en 2000 afin de réduire, voire d'éliminer, les effets néfastes des procédures analytiques sur les opérateurs et l'environnement²⁶. Les méthodes traditionnelles de détection de la mélamine, telles que la chromatographie, l'électrophorèse, l'électrophorèse capillaire et le dosage immuno-enzymatique (ELISA), sont utilisées pour identifier cette substance. Toutefois, parmi les nombreuses méthodes de détection, les capteurs électrochimiques ont suscité un vif intérêt en raison de leur excellente sensibilité, de leur sélectivité, de leur rapidité d'analyse et de leur facilité d'utilisation^30,31. La nanotechnologie verte exploite les voies biologiques pour synthétiser des nanomatériaux, ce qui permet de réduire la production de déchets dangereux et la consommation d'énergie, favorisant ainsi la mise en œuvre de pratiques durables. Les nanocomposites, par exemple, fabriqués à partir de matériaux respectueux de l'environnement, peuvent être utilisés dans les biocapteurs pour détecter des substances telles que la mélamine^32,33,34.
L'étude montre que la microextraction en phase solide (SPME) est utilisée efficacement grâce à son efficacité énergétique et sa durabilité supérieures aux méthodes d'extraction traditionnelles. Le caractère écologique et l'efficacité énergétique de la SPME en font une excellente alternative aux méthodes d'extraction traditionnelles en chimie analytique et offrent une méthode plus durable et efficace pour la préparation des échantillons³⁵.
En 2013, Wu et al. ont mis au point un biocapteur à résonance plasmonique de surface (mini-SPR) très sensible et sélectif, exploitant le couplage entre la mélamine et des anticorps anti-mélamine pour la détection rapide de la mélamine dans les préparations pour nourrissons par un dosage immunologique. Ce biocapteur SPR, associé à un dosage immunologique (utilisant de l'albumine sérique bovine conjuguée à la mélamine), constitue une technologie simple d'utilisation et peu coûteuse, avec une limite de détection de seulement 0,02 μg mL⁻¹³⁶.
Nasiri et Abbasian ont utilisé un capteur portable à haut potentiel, associé à des composites d'oxyde de graphène et de chitosane (GOCS), pour détecter la mélamine dans des échantillons commerciaux³⁷. Cette méthode a démontré une sélectivité, une précision et une réactivité exceptionnelles. Le capteur GOCS a présenté une sensibilité remarquable (239,1 μM⁻¹), une gamme linéaire de 0,01 à 200 μM, une constante d'affinité de 1,73 × 10⁴ et une limite de détection (LOD) atteignant 10 nM. Par ailleurs, une étude menée par Chandrasekhar et al. en 2024 a adopté une approche écologique et économique. Ils ont utilisé un extrait de pelure de papaye comme agent réducteur pour synthétiser des nanoparticules d'oxyde de zinc (ZnO-NPs) selon une méthode respectueuse de l'environnement. Ils ont ensuite développé une technique originale de microspectroscopie Raman pour le dosage de la mélamine dans les préparations pour nourrissons. Les nanoparticules de ZnO dérivées de déchets agricoles ont démontré un potentiel en tant qu'outil de diagnostic précieux et technologie fiable et peu coûteuse pour la surveillance et la détection de la mélamine38.
Alizadeh et al. (2024) ont utilisé une plateforme de fluorescence à base de réseau métallo-organique (MOF) ultrasensible pour le dosage de la mélamine dans le lait en poudre. La gamme de linéarité et la limite de détection du capteur, déterminées par la méthode 3σ/S, étaient respectivement de 40 à 396,45 nM (soit de 25 μg kg⁻¹ à 0,25 mg kg⁻¹) et de 40 nM (soit 25 μg kg⁻¹). Cette gamme est nettement inférieure aux limites maximales de résidus (LMR) fixées pour l'identification de la mélamine dans les préparations pour nourrissons (1 mg kg⁻¹) et autres échantillons alimentaires (2,5 mg kg⁻¹). Le capteur fluorescent (terbium (Tb)@NH₂-MIL-253(Al)MOF) a démontré une exactitude et une précision de mesure supérieures à celles de la CLHP pour la détection de la mélamine dans le lait en poudre. Les biocapteurs et les nanocomposites en chimie verte améliorent non seulement les capacités de détection, mais minimisent également les risques environnementaux, conformément aux principes du développement durable.
Les principes de la chimie verte ont été appliqués à diverses méthodes de dosage de la mélamine. Une approche consiste à développer une méthode de microextraction en phase solide dispersive verte, utilisant le polymère polaire naturel β-cyclodextrine réticulé avec de l'acide citrique pour l'extraction efficace de la mélamine⁴⁰ à partir d'échantillons tels que les préparations pour nourrissons et l'eau chaude. Une autre méthode utilise la réaction de Mannich pour le dosage de la mélamine dans le lait. Cette méthode est peu coûteuse, respectueuse de l'environnement et très précise, avec une gamme linéaire de 0,1 à 2,5 ppm et une faible limite de détection⁴¹. De plus, une méthode économique et respectueuse de l'environnement pour le dosage quantitatif de la mélamine dans le lait liquide et les préparations pour nourrissons a été développée par spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier (FTIR), avec une précision élevée et des limites de détection respectives de 1 ppm et 3,5 ppm⁴². Ces méthodes illustrent l'application des principes de la chimie verte au développement de méthodes efficaces et durables pour le dosage de la mélamine.
Plusieurs études ont proposé des méthodes innovantes pour la détection de la mélamine, telles que l'utilisation de l'extraction en phase solide et de la chromatographie liquide à haute performance (CLHP)43, ainsi que la chromatographie liquide à haute performance rapide (CLHP rapide), qui ne nécessite pas de prétraitement complexe ni de réactifs de paires d'ions, réduisant ainsi la quantité de déchets chimiques44. Ces méthodes fournissent non seulement des résultats précis pour la détermination de la mélamine dans les produits laitiers, mais sont également conformes aux principes de la chimie verte, minimisant l'utilisation de produits chimiques dangereux et réduisant l'impact environnemental global du processus analytique.
Quarante échantillons de différentes marques ont été testés en triple exemplaire, et les résultats sont présentés dans le tableau 2. Les concentrations de mélamine dans les préparations pour nourrissons et le lait en poudre variaient respectivement de 0,001 à 0,004 mg/kg et de 0,001 à 0,095 mg/kg. Aucune différence significative n'a été observée entre les trois groupes d'âge pour les préparations pour nourrissons. Par ailleurs, de la mélamine a été détectée dans 80 % du lait en poudre, tandis que 65 % des préparations pour nourrissons étaient contaminées.
La teneur en mélamine du lait en poudre industriel était plus élevée que celle du lait infantile, et la différence était significative (p<0,05) (Figure 2).
Les résultats obtenus étaient inférieurs aux limites fixées par la FDA (inférieures à 1 et 2,5 mg/kg). De plus, ils sont conformes aux limites fixées par le CAC (2010) et les directives européennes 45 et 46, à savoir la limite maximale autorisée de 1 mg/kg pour les préparations pour nourrissons et de 2,5 mg/kg pour les produits laitiers.
Selon une étude de 2023 menée par Ghanati et al.⁴⁷, la teneur en mélamine de différents types de lait conditionné en Iran variait de 50,7 à 790 μg kg⁻¹. Leurs résultats étaient inférieurs à la limite autorisée par la FDA. Nos résultats sont inférieurs à ceux de Shoder et al.⁴⁸ et de Rima et al.⁴⁹. Shoder et al. (2010) ont constaté que les niveaux de mélamine dans le lait en poudre (n=49), déterminés par ELISA, variaient de 0,5 à 5,5 mg/kg. Rima et al. ont analysé les résidus de mélamine dans le lait en poudre par spectrophotométrie de fluorescence et ont constaté que la teneur en mélamine dans le lait en poudre était de 0,72 à 5,76 mg/kg. Une étude a été menée au Canada en 2011 pour surveiller les niveaux de mélamine dans les préparations pour nourrissons (n=94) à l'aide de la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC/MS). Les concentrations de mélamine se sont avérées inférieures à la limite acceptable (norme préliminaire : 0,5 mg kg⁻¹). Il est peu probable que les taux de mélamine frauduleux détectés aient été utilisés pour augmenter la teneur en protéines. Toutefois, l'utilisation d'engrais, le déplacement du contenu des contenants ou des facteurs similaires ne peuvent expliquer ce phénomène. De plus, la source de la mélamine dans le lait en poudre importé au Canada n'a pas été divulguée⁵⁰.
Hassani et al. ont mesuré la teneur en mélamine du lait en poudre et du lait liquide sur le marché iranien en 2013 et ont obtenu des résultats similaires. Leurs analyses ont montré qu'à l'exception d'une marque de lait en poudre et de lait liquide, tous les échantillons étaient contaminés par la mélamine, avec des concentrations allant de 1,50 à 30,32 μg g⁻¹ dans le lait en poudre et de 0,11 à 1,48 μg ml⁻¹ dans le lait. Il est à noter que l'acide cyanurique n'a été détecté dans aucun des échantillons, ce qui réduit le risque d'intoxication à la mélamine pour les consommateurs.⁵¹ Des études antérieures ont évalué la concentration de mélamine dans les produits chocolatés contenant du lait en poudre. Environ 94 % des échantillons importés et 77 % des échantillons iraniens contenaient de la mélamine. Les concentrations de mélamine dans les échantillons importés variaient de 0,032 à 2,692 mg/kg, tandis que celles des échantillons iraniens variaient de 0,013 à 2,600 mg/kg. Globalement, la mélamine a été détectée dans 85 % des échantillons, mais une seule marque spécifique présentait des niveaux supérieurs à la limite autorisée.44 Tittlemier et al. ont rapporté des niveaux de mélamine dans le lait en poudre allant de 0,00528 à 0,0122 mg/kg.
Le tableau 3 résume les résultats de l'évaluation des risques pour les trois groupes d'âge. Le risque était inférieur à 1 dans tous les groupes d'âge. Par conséquent, la présence de mélamine dans les préparations pour nourrissons ne présente aucun risque non cancérogène pour la santé.
Une faible contamination des produits laitiers peut être due à une contamination accidentelle lors de la préparation, tandis qu'une contamination plus importante peut être due à des ajouts intentionnels. De plus, le risque global pour la santé humaine lié à la consommation de produits laitiers à faible teneur en mélamine est considéré comme faible. On peut donc conclure que la consommation de produits contenant de si faibles niveaux de mélamine ne présente aucun risque pour la santé du consommateur⁵².
Compte tenu de l'importance de la gestion de la sécurité alimentaire dans l'industrie laitière, notamment pour la protection de la santé publique, il est primordial de développer et de valider une méthode d'évaluation et de comparaison des teneurs et des résidus de mélamine dans le lait en poudre et les préparations pour nourrissons. Une méthode spectrophotométrique HPLC-UV simple et précise a été mise au point pour le dosage de la mélamine dans ces produits. Sa fiabilité et sa précision ont été validées. Les limites de détection et de quantification de la méthode se sont avérées suffisamment sensibles pour mesurer les teneurs en mélamine dans ces produits. Nos données montrent que de la mélamine a été détectée dans la plupart des échantillons iraniens. Toutes les teneurs détectées étaient inférieures aux limites maximales autorisées par la CAC, ce qui indique que la consommation de ces produits laitiers ne présente aucun risque pour la santé humaine.
Tous les réactifs chimiques utilisés étaient de qualité analytique : mélamine (2,4,6-triamino-1,3,5-triazine) à 99 % de pureté (Sigma-Aldrich, Saint-Louis, Missouri, États-Unis) ; acétonitrile de qualité HPLC (Merck, Darmstadt, Allemagne) ; eau ultrapure (Millipore, Morfheim, France). Filtres seringues jetables (Chromafil Xtra PVDF-45/25, porosité de 0,45 µm, diamètre de la membrane de 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Allemagne).
Un bain à ultrasons (Elma, Allemagne), une centrifugeuse (Beckman Coulter, Krefeld, Allemagne) et un HPLC (KNAUER, Allemagne) ont été utilisés pour préparer les échantillons.
Un chromatographe liquide haute performance (HPLC) (KNAUER, Allemagne) équipé d'un détecteur UV a été utilisé. Les conditions d'analyse HPLC étaient les suivantes : un système UHPLC Ultimate équipé d'une colonne analytique ODS-3 C18 (4,6 mm × 250 mm, granulométrie de 5 µm) (MZ, Allemagne) a été utilisé. L'éluant (phase mobile) était un mélange TFA/méthanol (450:50 mL) avec un débit de 1 mL/min. La longueur d'onde de détection était de 242 nm. Le volume d'injection était de 100 µL et la température de la colonne de 20 °C. Le temps de rétention du médicament étant long (15 minutes), l'injection suivante a été effectuée 25 minutes plus tard. La mélamine a été identifiée par comparaison du temps de rétention et du pic du spectre UV avec des standards de mélamine.
Une solution étalon de mélamine (10 μg/mL) a été préparée avec de l'eau et conservée au réfrigérateur (4 °C) à l'abri de la lumière. Cette solution mère a été diluée avec la phase mobile pour préparer les solutions étalons de travail. Chaque solution étalon a été injectée sept fois dans le système HPLC. L'équation d'étalonnage (équation 10) a été calculée par régression linéaire de l'aire du pic en fonction de la concentration.
Du lait de vache en poudre commercialisé (20 échantillons) et des échantillons de différentes marques de préparations pour nourrissons à base de lait de vache (20 échantillons) ont été achetés dans des supermarchés et des pharmacies iraniennes pour l'alimentation de nourrissons de différents groupes d'âge (0-6 mois, 6-12 mois et >12 mois) et conservés au réfrigérateur (4 °C) jusqu'à leur analyse. 1 ± 0,01 g de lait en poudre homogénéisé a ensuite été pesé et mélangé à 5 mL d'un mélange acétonitrile/eau (50/50, v/v). Le mélange a été agité pendant 1 min, puis soumis à un traitement par ultrasons pendant 30 min, et enfin agité pendant 1 min. Le mélange a ensuite été centrifugé à 9 000 × g pendant 10 min à température ambiante et le surnageant a été filtré dans un flacon de 2 mL pour échantillonneur automatique à l'aide d'un filtre seringue de 0,45 μm. Le filtrat (250 μl) a ensuite été mélangé avec de l'eau (750 μl) et injecté sur le système HPLC10,42.
Pour valider la méthode, nous avons déterminé le taux de récupération, l'exactitude, la limite de détection (LD), la limite de quantification (LQ) et la précision dans des conditions optimales. La LD a été définie comme la concentration de l'échantillon pour laquelle la hauteur du pic est trois fois supérieure au niveau de bruit de fond. La LQ, quant à elle, a été définie comme la concentration de l'échantillon pour laquelle la hauteur du pic est dix fois supérieure au rapport signal/bruit.
La réponse du dispositif a été déterminée à l'aide d'une courbe d'étalonnage composée de sept points de données. Différentes concentrations de mélamine ont été utilisées (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 et 1,2). La linéarité de la méthode de calcul de la mélamine a été établie. De plus, différentes concentrations de mélamine ont été ajoutées aux échantillons témoins. La courbe d'étalonnage a été construite par injection continue de 0,1 à 1,2 μg mL⁻¹ d'une solution standard de mélamine dans des échantillons de préparation pour nourrissons et de lait en poudre. Son coefficient de détermination (R²) est de 0,9925. L'exactitude a été évaluée par la répétabilité et la reproductibilité de la méthode, obtenues par injection d'échantillons le premier jour et pendant les trois jours suivants (en triplicata). La répétabilité de la méthode a été évaluée en calculant le coefficient de variation (CV) pour trois concentrations différentes de mélamine ajoutée. Des études de récupération ont été réalisées pour déterminer la précision. Le degré de récupération par la méthode d'extraction a été calculé à trois niveaux de concentration de mélamine (0,1, 1,2, 2) dans des échantillons de préparation pour nourrissons et de lait en poudre9,11,15.
L’apport journalier estimé (AJE) a ​​été déterminé à l’aide de la formule suivante : AJE = Ci × Cc/BW.
Où Ci représente la teneur moyenne en mélamine, Cc la consommation de lait et BW le poids moyen des enfants.
L'analyse des données a été réalisée à l'aide du logiciel SPSS 24. La normalité des données a été vérifiée par le test de Kolmogorov-Smirnov ; toutes les données ont fait l'objet de tests non paramétriques (p = 0). Par conséquent, les tests de Kruskal-Wallis et de Mann-Whitney ont été utilisés pour déterminer les différences significatives entre les groupes.
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